液相色譜儀廠家操作及原理
液相色譜儀是一種廣泛應用于化學、藥學、環境、食品等領域的分析儀器,主要用于分離、鑒定和定量分析液態樣品中的不同成分。與氣相色譜儀(GC)相比,液相色譜儀適用于不易揮發或熱敏感的樣品,如大部分**、蛋白質、多肽、糖類及環境樣品等。
一、液相色譜儀的工作原理
液相色譜的基本原理是基于液體在色譜柱中與固定相的相互作用,通過樣品的分配作用使不同組分在色譜柱中以不同速度流動,最終在檢測器中得到分離并進行定量分析。
具體過程如下:
1.樣品注入:液體樣品通過注射器或自動進樣器注入到流動相中。
2.流動相與固定相:
①流動相(移動相):是通過色譜柱的液體(溶劑或溶液),它幫助樣品溶解并推動樣品通過色譜柱。常見的流動相有水、甲醇、乙腈等,通常使用高壓泵來提供足夠的壓力,使流動相穩定流動。
②固定相(色譜柱填充物):色譜柱內填充的材料,常見的是硅膠或聚合物,表面帶有化學基團。固定相的特性(如極性、孔徑等)決定了它與樣品的相互作用方式。樣品中不同組分會與固定相有不同的親和力,從而在色譜柱中分離開來。
3.分配與分離:樣品中的不同組分在流動相的作用下進入色譜柱,并與固定相發生相互作用(如吸附、溶解、親水性/疏水性相互作用等)。由于不同組分與固定相的相互作用力不同,它們在色譜柱中停留的時間不同,分子會在色譜柱中以不同速度流動,從而實現分離。
4.檢測:分離后的組分會在色譜柱出口通過檢測器進行檢測。常見的檢測器包括:紫外/可見光吸收檢測器(UV/Vis)、示差折光檢測器(RI)、熒光檢測器(FLD)、電化學檢測器(EC)、質譜檢測器(MS)等。檢測器會記錄每個組分在柱中流出的時間(稱為保留時間)和其濃度。
5.數據分析:檢測器輸出信號轉化為色譜圖。色譜圖上,X軸表示時間(通常是保留時間),Y軸表示檢測信號的強度。不同組分會形成不同的峰,峰的保留時間和峰面積(或高度)可以用來確定樣品中各成分的性質和濃度。
二、 液相色譜儀的操作流程
1.準備工作:
①選擇合適的色譜柱,根據樣品的性質選擇合適的固定相和柱子尺寸。
②選擇合適的流動相,根據分析目標和樣品的性質來選擇流動相的成分、濃度和pH等。
③準備樣品,通常需要將固體樣品溶解在合適的溶劑中,液體樣品則需要根據需要進行過濾、稀釋等處理。
2.設備啟動:
①開啟液相色譜儀并設置運行參數(如流速、柱溫、溶劑比例等)。
②通過進樣系統將樣品注入流動相。
3.分析過程:
①樣品在流動相的作用下進入色譜柱,進行分離。
②分離后的各組分通過檢測器檢測,記錄并繪制色譜圖。
4.數據分析:通過色譜圖可以獲得每個組分的保留時間和濃度,進而確定樣品的成分和含量。
5.清洗和維護:使用完成后,必須對色譜柱、溶劑供給系統等進行清洗,防止樣品殘留,保證下次實驗的準確性。
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